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植物ATP酶(ATPase)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書
BS-7929 植物ATP酶(ATPase)ELISA試劑盒
以下是植物ATP酶(ATPase)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明書綜合指南：
一、檢測原理
采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：
微孔板預(yù)包被ATP酶抗體，依次加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)品和HRP標(biāo)記檢測抗體
經(jīng)溫育洗滌后，TMB底物在過氧化物酶催化下顯色(藍(lán)→黃)，顏色深度與ATP酶濃度正相關(guān)
用酶標(biāo)儀在450nm波長測定OD值，計算樣品活性或濃度
二、樣本處理要求
樣本類型 處理方法
血清/血漿 采集后1000×g離心15-20分鐘，避免使用含NaN3的抗凝劑(抑制HRP活性)
植物組織 勻漿后1000×g離心20分鐘取上清，分裝凍存于-20℃(避免反復(fù)凍融)
細(xì)胞上清液 1000×g離心10分鐘去除顆粒
三、關(guān)鍵操作步驟
試劑準(zhǔn)備?：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品需用稀釋液復(fù)溶
洗滌液按1:25用蒸餾水稀釋
加樣順序?：
空白孔→標(biāo)準(zhǔn)品孔→樣本孔
每孔依次加入樣本/標(biāo)準(zhǔn)品→檢測抗體→酶結(jié)合物
溫育條件?：
37℃避光反應(yīng)30分鐘，嚴(yán)格計時
終止反應(yīng)?：
加入終止液(2N H?SO?)后立即測定
四、注意事項(xiàng)
避免底物TMB接觸金屬器械，使用塑料吸頭加樣
不同批號試劑不可混用，未用完板條需密封防潮
顯色后若孔內(nèi)出現(xiàn)沉淀，需重新離心后測定
實(shí)驗(yàn)需設(shè)置復(fù)孔，CV值應(yīng)<15%
五、存儲與有效期
未開封試劑盒：2-8℃保存(部分組分需-20℃)
有效期通常為6個月，復(fù)溶后標(biāo)準(zhǔn)品不可重復(fù)使用
注：本試劑盒僅限科研使用，不可用于臨床診斷。具體操作參數(shù)請以實(shí)際試劑盒說明書為準(zhǔn)。
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