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BUNSEN本生分享：熒光定量PCR耗材的選擇
PCR是分子生物學研究的基礎實驗，用于在短時間內(nèi)將單拷貝的目標DNA序列擴增至數(shù)百萬拷貝。除了選擇可靠的PCR儀外，用于PCR反應的塑料耗材除考慮兼容性，還要求避免存在污染物和抑制劑，同時又具有可保障最佳PCR效果的高質量。因此，如何選擇作為用戶，了解如何選擇PCR / qPCR耗材，顯得尤其重要。
第一步，選擇通量
根據(jù)樣品數(shù)量選擇通量，PCR耗材的最常見規(guī)格為：
管：0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL
96 孔板：0.2 mL, 0.1 mL
384 孔板：0.02 mL
單管
8聯(lián)管
96孔板
384孔板
第二步， 選擇加樣體積：不同類型管，可供選擇的容量體積不同。
單管: 0.5 mL, 0.2 mL(標準), 0.1 mL(低容，或稱快速)
8聯(lián)管： 0.2 mL(標準), 0.1 mL(低容，或稱快速)
96 孔板：0.2 mL(標準), 0.1 mL(低容，或稱快速)
384 孔板：0.02 mL
“(低容)"意味著高度更低。 低容耗材更短的設計程度減少了反應體系上方的空間，降低了蒸發(fā)的影響并提高了熱傳導效率，因此也被稱為“快速"管或板。
第三步， 對于PCR板的選擇，需要進一步根據(jù)實驗類型和儀器選擇裙邊、切割角、顏色等。
3.1裙邊： 根據(jù)儀器加熱模塊類型選擇
無裙邊:
兼容絕大多數(shù)PCR儀和實時PCR儀的模塊，易于剪裁，但不適用于自動化應用。
半裙邊：
板的邊緣周圍具有短的邊緣，加熱或移液過程中提供足夠的支撐，不宜變形彎曲
全裙邊：
有覆蓋板高度的邊緣，適用于自動化操作
3.2顏色： 透明或白色
PCR板通常提供透明、磨砂或白色不同的顏色形式，以適用于不同類型PCR反應。在實時PCR的反應時，與透明耗材相比，我們更推薦使用白色塑料耗材，以實現(xiàn)靈敏和準確的熒光檢測。
白色耗材通過阻止熒光折射出管來提高qPCR數(shù)據(jù)的靈敏度和一致性。折射被最小化時，更多的信號被反射回檢測器，從而增加信噪比(圖B)。此外，白色管壁可阻止熒光信號傳遞至PCR儀模塊，避免被吸收或不一致地反射熒光信號，從而使重復實驗中的差異降至低。在極少數(shù)情況下，如果熒光探測器由于白色孔的信號反射增強而過飽和，可以使用磨砂孔替代。
3.4 切角
切角是對PCR板的一個角缺失，取決于所需要適配的儀器。切角可能位于96孔板的H1，H12或A12位置，或384孔板的A24位置
3.5品牌選擇
市場上有許多品牌和廠家提供PCR耗材，選擇時需要考慮哪些因素呢? PCR耗材品質由包括原料、無污染、一致性等決定。
1. 原料：Thermo Scientific選用優(yōu)質的全新醫(yī)用級聚丙烯原料
2. 生產(chǎn)環(huán)節(jié)：十萬級潔凈車間生產(chǎn)，無RNase、DNase和外源DNA污染
3. 批間一致性：遵循嚴格的生產(chǎn)標準和檢測標準，由資深專家使用的設備進行生產(chǎn)，確
保批間一致性和可追溯性，確保用戶獲得可靠PCR實驗數(shù)據(jù)。
第四步，選擇正確的PCR膜
PCR板選好后，還需要選擇一張好的PCR膜來密封，才能保證獲得準確可靠的PCR數(shù)據(jù)，這對實時PCR尤其重要!
我們的Thermo Scientific™ Absolute™ qPCR粘性封口膜(貨號AB1170)產(chǎn)品采用壓力敏感密封設計。只有在施加壓力的情況下，這種非粘性粘合產(chǎn)品才可以粘合到孔的邊緣上。其只在需要粘合的位置產(chǎn)生良好的密封效果，使孔開口位置變得超透明，實現(xiàn)的熒光信號傳輸。
強效壓敏粘附，可產(chǎn)生牢固的粘合效果，以盡量減少蒸發(fā)，使每個樣本保持較高的PCR效率
其光學透明度可用于qPCR及其他熒光應用
一致的封口厚度和透明度，確保整塊板信號傳輸相等
可剝離，剝離后平板上無粘性殘留
膜兩端無粘性，輕松進行密封和去除操作
適用溫度范圍：–80°C至110°C
PCR耗材 本生一直視質量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。
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