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本生淺談：酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試驗辦法
酶聯(lián)免疫測定是將抗原抗體反響的高度特異性和酶的催化作用相結(jié)合，開展建立一種非放射性符號免疫分析辦法。因為ELISA具有靈敏度高、特異性強，酶免疫試劑的性質(zhì)比較穩(wěn)定，操作辦法簡潔快速、無放射性污染以及應(yīng)用范圍廣等很多優(yōu)點，在醫(yī)學根底理論研究，病毒學和生物化學查驗等工作中應(yīng)用十分廣泛。
該法需將純化的抗原包被在固相載體，與必定稀釋度的待側(cè)血清反響，然后與酶符號的第二抗體(抗人IgG,IgA,IgM或抗人IgG.A.M的混合物)反響，酶可催化色原反響，在酶標測定儀必定波長下進行比色，測定吸光度。
ELISA試劑盒的關(guān)鍵是要具備高質(zhì)量純化或重組的抗原，對生產(chǎn)廠家的抗原要求很高。因為純化的或重組的抗原越來越多，以及商品化的高質(zhì)量的ELISA試劑盒的面市，它應(yīng)用于臨床免疫試驗室的本身抗體的檢測已日漸增多，該法檢測本身抗體快速、靈敏及特異性高。
一、免疫熒光法----本身抗體確診的標準技能(IFA)
免疫熒光測定法可分為直接和直接兩類，在本身抗體檢測中，以直接免疫熒光法zui為常用。因為本身抗原的方位決議了其相應(yīng)的抗體的典型熒光形式，該法能經(jīng)過顯微鏡觀測地判別安排或細胞內(nèi)熒光的分布。
將已稀釋血清與試驗基質(zhì)進行溫育，令特異性抗體與試驗基質(zhì)中相應(yīng)抗原結(jié)合，然后再與熒光符號的第二抗體溫育，zui后在熒光顯微鏡下觀察相應(yīng)部位的特異性熒光形式。
此辦法靈敏、重復(fù)性好。但需要一臺質(zhì)量較好的熒光顯微鏡，且對操作人員要較高，操作雜亂耗時長，繁瑣。
二、免疫印跡法(Immunoblot assay)(westerblot)
此法是將聚丙xi酰胺凝膠電泳別離蛋白及多肽與免疫反響的高特異性相結(jié)合的一項技能。蛋白質(zhì)在電泳中依分子量大小別離，然后將別離好的蛋白轉(zhuǎn)印到硝酸纖維薄膜上，用酶符號的抗體或蛋白A進行染色。該法簡單、快速。是現(xiàn)在美國、中國等國際上很多國家衛(wèi)生機構(gòu)的zui終承認辦法。但其制備辦法繁瑣、本錢相對較高。
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